| Description |
Gamma-delta (??) T lymfocyty patří mezi významné efektorové buňky přirozené imunity s prokázanou protinádorovou reaktivitou proti agresivnímu nádoru mozku glioblastoma multiforme (GBM) (Knight et al., PLoS One 2013). Terapeutické přístupy imunoterapie GBM mají omezenou úspěšnost, zejména v důsledku ochranné bariéry mozku a imunosupresivního mikroprostředí nádoru. Cílem projektu je detailní analýza V?1 a V?2 populací ?? T lymfocytů infiltrovaných v nádorové tkáni a párových vzorcích periferní krve pacientů GBM. V projektu je zařazeno 33 pacientů GBM; 16 žen (48%) a 17 mužů (52%), medián věku pacientů byl 60 let (rozmezí 33-80let). Všichni pacienti byli operování na Neurochirurgické klinice FN Brno se snahou o maximální možnou cytoredukci a získání reprezentativních vzorků patologické tkáně. Po operaci byla u pacientů v Neuroonkologickém centru Brno na Neuroonkologické komisi MOÚ indikována komplexní onkologická terapie zahrnující standardní terapii podle Stuppova protokolu tj. konkomitantní chemo-radioterapií a adjuvantní chemoterapii temozolomidem, která včetně paliativních režimů probíhá na Klinice radiační onkologie a Klinice komplexní onkologické péče Masarykova onkologického ústavu. Populace CD3+V?1 ?? T buněk byla určena u zdravých dárců (HD, n=35, medián věku je 61 let) v periferní krvi průtokovou cytometrií v rozmezí 0,1-6,5% (medián 1,8%), CD3+V?2 ?? T lymfocyty u HD stanoveny v rozmezí 0,3-12,5% (medián 3,6%). U GBM pacientů byl nalezen signifikantní nárůst V?1 ?? T buněk (P<0,01) ve srovnání se zdravými dárci. V?2 ?? T buňky byly u GBM pacientů sníženy (P<0,05). Vzorky tumorů zpracováváme pomocí enzymatických kitů (disociátor Miltenyi), buněčné suspenze jsou analyzovány průtokovou cytometrií pro stanovení exprese receptorů NKG2D, DNAM1, TIGIT, PD-1 a Tim3. Nádorové buňky jsou fenotypovány protilátkami stresových ligandů MICA/B, ULBP a CD122, CD155. Dále jsme demonstrovali cytotoxickou reaktivitu ?? T lymfocytů vůči nádorovým liniím U251 a U373, a zejména vůči primárním nádorovým buňkám. Popsali jsme významnou úlohu EphA2 tyrosin kinázy v interakcích s V?1 T lymfocyty. Blokováním exprese EphA2 protilátkou a pomocí inhibitoru ALW-II-41-27 jsme pozorovali významné snížení specifické cytotoxicity. Analýza solubilních proteinů v plazmě pacientů metodou Luminex určila významně zvýšené hladiny MICA, check-point inhibitoru B7-H3 (CD276) a PD-L1 (B7-H1, CD274).
|