Mutagenesis as a tool for improving lectins from pathogenic bacteria
| Název česky | Mutageneze jako nástroj pro vylepšování lektinů z patogenních mikroorganismů |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2012 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Řízená evoluce je široce využívaná v proteinovém inženýrství pro produkcí proteinů s pozměněnými anebo vylepšenými vlastnostmi. Tento účinný nástroj zahrnuje několik hlavních přístupů. První je náhodná mutageneze, která je využívána pro tvorbu náhodných mutací kdekoliv v genu zájmu. Druhým je cíleně náhodná mutageneze, která je využívána k přípravě mutantů s náhodnými substitucemi v předem vybraných místech. Další metodou je místně cílená mutageneze, která je založená na racionálním designu a slouží pro vytváření specifických záměn aminokyselin ve vybraných místech. V této práci jsou využity dvě mutační techniky - cíleně náhodná mutageneze pomocí směsi oligonukleotidových primerů a místně cílená mutageneze pomocí primerů nesoucích specifické substituce. Lektiny jsou proteiny produkované různými mikroorganismy. Jsou schopné specificky vázat různé cukry. Tento fakt je velmi důležitý především při interakci hostitele s patogenem, kdy lektiny pomáhají patogenu v adhesi na cukerná residua přítomná na hostitelských buňkách. Pseudomonas aeruginosa, Ralstonia solanacearum a Burkholderia cenocepacia jsou příležitostné patogeny, které napadají především pacienty se sníženou imunitou. Tyto bakterie produkují lektiny, které vykazují významnou podobnost. PA-IIL lektin z bakterie P. aeruginosa byl vybrán jako primární cílový gen k modifikaci pomocí cíleně náhodné mutageneze. Tento rozpustný protein je velmi dobře charakterizován a vykazuje velmi vysokou afinitu pro L-fukosu ale váže ještě několik dalších monosacharidů s podobnou stereochemií např. L-galaktosu nebo D-mannosu. Ortology tohoto lektinu byly identifikovány v bakteriích R. solanacearum (RS-IIL) a B. cenocepacia (BC2L-A). Nicméně tyto dva lektiny preferují vazbu D-mannosy namísto L-fukosy. Cílem této práce je připravit Ca-dependentní lektiny čistě specifické pro L-fukosu. Lektiny s vylepšenými vlastnostmi mohou být později využity v biotechnologii a pro bioanalytcké účely. |
| Související projekty: |