Capillary electrophoresis-integrated immobilized enzyme reactor for kinetic and inhibition assays of beta-secretase as the Alzheimer's disease drug target
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2019 |
| Druh | Článek v odborném periodiku |
| Časopis / Zdroj | Journal of Separation Science |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| www | Full Text |
| Doi | http://dx.doi.org/10.1002/jssc.201800947 |
| Klíčová slova | beta-secretase; capillary electrophoresis; immobilized enzyme reactor; inhibition; magnetic particles |
| Popis | Reaktory z imobilizovaných enzymů integrovaných do kapilární elektroforézy představují stále populárnější alternativu pro enzymová kinetická a inhibiční stanovení díky jejich jedinečnému souboru vlastností včetně ekonomičnosti, opakovanému použití enzymu, minimální spotřebě vzorku, rychlé analýze a jednoduché automatizaci. V této práci představujeme vývoj a aplikaci reaktoru z imobilizovaného enzymu integrovaného do CE založeného na magnetických částicích pro kinetické a inhibiční stanovení beta sekretázy, klíčového enzymu v rozvoji Alzheimerovy choroby a slibného cíle léčiv. Dokumentujeme optimalizaci imobilizačního postupu, charakterizaci imobilizované beta sekretázy, optimalizaci vzájemně kompatibilního inkubačního protokolu a separační metody, stejně tak jako tvorbu reaktoru z imobilizovaného enzymu integrovaného do CE. Použitelnost reaktoru z imobilizovaného enzymu integrovaného do CE byla demonstrována kinetickým stanovením pomocí neznačeného substrátu a inhibičními stanoveními za využití tři strukturně odlišných referenčních inhibitorů. Výsledné kinetické a inhibiční parametry jasně podporují použitelnost zde prezentované metody stejně jako dokumentují zákonitosti, na které je nutné brát zřetel při porovnávání výsledků s jinými metodami. |
| Související projekty: |