Zobrazovací imunohistochemická metoda pro značení řezů sferoidů s využitím zlatých nanočástic pomocí laserové ablace a hmotnostní spektrometrie s indukčně vázaným plazmatem
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2021 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Sferoidy jsou používané 3D buňkové modely, které dokáží reprezentovat skutečné prostředí nádorové tkáně. Jsou tak dobrým modelem pro imunohistochemické (IHC) značení a 2D nebo 3D zobrazování cílového proteinu v řezech tkání. Rozložení proliferujících buněk ve vnějších částech, kde je dostatek živin a kyslíku, a výskytem nekrotických buněk blíže středu sferoidu tedy připomíná mikroprostředí nádoru. Jedním z markerů proliferace je protein Ki-67, na jehož detekci pomocí fluorescenční mikroskopie se rutinně používá značení primární a sekundární protilátkou s fluoroforem. Často je také využívána tvorba velmi pevné vazby avidin-biotin, kdy je jeden z partnerů označen detekční značkou. Označením proteinu Ki-67 pomocí zlaté nanočástice (AuNP) o definované velikosti umožňuje vysoce citlivé stanovení tohoto markeru pomocí laserové ablace spojené s hmotnostní spektrometrií s indukčně vázanou plazmou (LA ICP MS). V tomto příspěvku je popsán vývoj metody IHC značení řezů sferoidu tvořených buňkami adenokarcinomu tlustého střeva z linie HT-29. Pozornost je věnována zejména eliminaci nespecifických interakcí nanočástic pomocí proteinových či neproteinových blokačních roztoků. Jsou využity 20nm AuNP s adsorbovaným nebo kovalentně navázaným streptavidinem. |
| Související projekty: |