Zrání monoblastů BM2 je doprovázeno zvýšenou expresí vimentinu
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2003 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | VII. Pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Onkologie a hematologie |
| Klíčová slova | monoblasts; vimentin; differentiation; proteomics |
| Popis | Buněčná linie BM2 byla připravena infekcí nezralých kuřecích myeloidních buněk virem ptačí myeloblastózy,který transdukuje onkogen v-myb. Vzniklé monoblasty konstitutivně exprimují v-myb a jejich terminální diferenciace je proto zablokována. Obnovení diferenciační dráhy buněk BM2 lze dosáhnout např. působením forbolového esteru TPA, inhibitorem histonových deacetyláz trichostatinem A nebo prostřednictvím aktivovaných jaderných receptorů pro kyselinu retinovou. V této práci jsme se zaměřili na charakterizaci diferencujících se buněk BM2 a hledání proteinových markerů využitelných při diferenciačních studiích. Prokázali jsme, že působením forbolového esteru TPA se v jaderné frakci zrajících buněk BM2 objevuje dominantní protein o molekulové hmotnosti 55 kDa, který není přítomen v buňkách BM2 exprimujících lidský gen RAR vystavených kombinovanému působení TPA/RA. Tento protein byl po elektroforéze SDS-PAGE podroben redukci, alkylaci a proteolýze trypsinem přímo v gelu. Po extrakci z gelu byla molekulová hmotnost vzniklých peptidů určena hmotnostní spektrometrií MALDI-TOF. Srovnáním získaných dat s údaji v databázích jsme tento protein identifikovali jako vimentin. Experimentálně jsme tento závěr potvrdili vimentin-specifickou protilátkou. Protože exprese vimentinu stoupá v buňkách BM2 indukovaných k diferenciaci působením TPA a trichostatinu A a zůstává nezměněna u buněk BM2RAR indukovaných RA, můžeme vyvodit závěr, že vimentin představuje vhodný marker pro rozlišení diferenciačních drah buněk BM2. |
| Související projekty: |