Metoda přímé detekce specifických genů v koloniích bakterií
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2003 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | Tomáškovy dny 2003 |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Genetika a molekulární biologie |
| Klíčová slova | Staphylococcus aureus; S epidermidis; S. hyicus; S intermedius; toxins |
| Popis | V širokém spektru molekulárně genetických metod používaných v diagnostice klinicky významných druhů bakterií jsou nejčastěji používány metody makrorestrikční analýzy pomocí pulzní elektroforézy a PCR amplifikace sekvencí specifických genů kódujících faktory virulence. Klíčovou roli v identifikaci těchto genů hraje využití molekulárních sond a hybridizace. Na našem pracovišti byla vyzkoušena a ověřena metoda hybridizace kolonií, a to na toxinogenních kmenech bakterií rodu Staphylococcus. V této práci byly v hybridizačních experimentech použity digoxigeninem značené molekulární sondy, které jsou odvozeny ze sekvencí genů kódujících enterotoxin C (SEC) a termostabilní nukleázu (TN). Umožnily detekovat přítomnost genu sec1 a genu nuc přímo v genomu jedenácti SEC- a třinácti TN-pozitivních kmenů S. aureus. U dvou SEC negativních kmenů S. aureus a u jiných druhů stafylokoků jako jsou S. epidermidis, S. hyicus a S. intermedius, nebyly zaznamenány žádné hybridizační signály. Lze konstatovat, že tato metoda poskytuje primární informaci o přítomnosti určité sekvence v genomu jako celku. Je vhodná pro základní genetický skríning mikroorganismů, zejména ve smíšených kulturách. Metoda je výhodná z hlediska úspory času a materiálu potřebného na izolaci DNA a Southernův přenos a je dostačující tam, kde nejsou kladeny nároky na přesnou lokalizaci dané sekvence v chromozomu. |
| Související projekty: |