Analýza proteomu polyvalentního bakteriofága 812
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2004 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | VIII. Pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů. Sborník abstraktů |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| www | http://orion.chemi.muni.cz/Setkani/setkani8/index.htm |
| Obor | Genetika a molekulární biologie |
| Klíčová slova | bacteriophage proteomics; MALDI-TOF; therapeutic bacteriphage; Staphylococcus bacteriophage |
| Popis | Bakteriofág 812 je polyvalentní stafylokokový fág, lyzující široké spektrum druhů rodu Staphylococcus, převážně pak kmeny druhu S. aureus. Pro své lytické vlastnosti je vhodným kandidátem pro fágovou terapii, při níž jsou bakteriofágy využívány pro léčbu stafylokokových infekcí, převážně těch, které jsou vyvolány kmeny rezistentními k antibiotikům. V této práci se zaměřujeme na analýzu fágového proteomu, a to především na strukturní a lytické proteiny, které mají vztah k rozmezí hostitele. Fág 812 byl pomnožen na kmeni S. aureus SA812, purifikován ultracentrifugací v gradientu CsCl a dialyzován proti vodě. DNA uvolněná z fágových částic byla odstraněna DNázou I. Fágové proteiny byly denaturovány krátkodobým povařením s pufrem obsahujícím SDS a DTT a analyzovány jednorozměrnou elektroforézou na polyakrylamidovém gelu. Po obarvení gelu pomocí Coomassie brilliant blue a stříbra jsme nalezli 6 výrazných pruhů, které jsme vyřízli z gelu, podrobili štěpení trypsinem na specifické peptidy a dále analyzovali hmotnostní spektrometrií. Naměřené údaje byly porovnávány s aminokyselinovou sekvencí, kterou jsme získali přepisem známých sekvencí DNA fága 812. Technikou MALDI (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionisation) jsme prozatím identifikovali dva strukturní proteiny - hlavní kapsidový a hlavní bičíkový protein. Snažíme se dále nalézt rozdíly v proteomu příbuzných fágů SK311 a U16 a zjistit, jak tyto rozdíly souvisejí s jejich odlišným hostitelským rozmezím. |
| Související projekty: |