Využití DNA diagnostiky u pacientů s povrchovou keratitidou virového původu
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2008 |
| Druh | Článek v odborném periodiku |
| Časopis / Zdroj | Česká a slovenská oftalmologie |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | ORL, oftalmologie, stomatologie |
| Klíčová slova | PCR keratitis DNA diagnostics herpes simplex virus varicella zoster virus adenovirus RealTime |
| Popis | Cíl: Autoři hodnotí význam DNA diagnostiky u pacientů s povrchovou keratitidou virového původu a její možnosti využití pro sledování účinnosti léčby. DNA analýzou byla stanována přítomnost virů HSV1, HSV2, VZV a adenovirů. Materiál a metodika: Využili jsme soubor 54 pacientů (33 mužů a 21 žen) průměrného věku 45,6 let, kteří na naší klinice byli léčeni pro povrchovou keratitidu či keratouveitidu virového původu. Při zjištění pozitivního výsledku pomocí DNA analýzy byl proveden kontrolní odběr po 7-10 denních intervalech do negativního výsledku a dále také při suspektní recidivě onemocnění. Jednorázovou mikropipetou a vatovým tamponem byl proveden stěr z místa postižení a bylo odebráno cca 50 mikrolitrů slz ze spojivkového vaku. Tampón i slzy byly protřepány s pufrem EliDNA Store Kit (ELISABETH PHARMACON, ČR), který zabraňuje degradaci DNA a umožňuje skladování a přepravu vzorků při pokojové teplotě. Vzorky byly přepraveny do laboratoře, kde byla DNA izolována pomocí kolonek kitem UltraClean DNA Tissue (MoBio, USA). Izolovaná DNA posloužila pro detekci virů HSV1, HSV2, VZV a adenovirů pomocí nested PCR. Všechny vzorky byly dále prověřeny na přítomnost HSV1 in house metodikou RealTime s využitím próby TaqMan a přístroje Applied Biosystems RealTime System 7300. Kontrolní vyšetření bylo prováděno také kultivačně ze stejného materiálu jinou laboratoří. Výsledky: Celkem bylo provedeno 82 odběrů a 230 DNA analýz. DNA diagnostika vykázala pozitivní výsledky u 28 pacientů HSV1, 1x VZV, 16 pacientů bylo pozitivních na ADV. Pozitivita vzorků pro HSV1 byla ověřena in house metodou RealTime PCR i komerčně dostupným in vitro diagnostickým zdravotnickým prostředkem End-Point PCR HSV1/2 (Nanogen Advanced Diagnostics, Itálie). Všechna kontrolní vyšetření prováděná v jiné laboratoři vyšla kultivačně negativní. Opakovaně byla detekce pro monitorování léčby provedena u 9 pacientů. Závěr: DNA diagnostika se jeví jako rychlá a účelná metoda zjištění etiologického agens u pacientů s povrchovou keratitidou, která umožňuje velmi přesné monitorování účinnosti léčby. |
| Související projekty: |