Comparison of electrophoretic methods for dextromethorphan metabolites separation obtained by in vitro incubation with microsomes
| Název česky | Srovnání elektroforetických method pro separaci metabolitů dextrometofanu generovaných mikrosomy in vitro inkubací |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2008 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | BOOK OF ABSTRACTS 16th International Symposium on Capillary Electroseparation Techniques |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Biochemie |
| Klíčová slova | drug metabolism; microsomes; cytochrome P450; on-capillary microreaction; electrophoresis |
| Popis | In-vitro biotransformace v přítomnosti mikrosomů prezentují systém vhodný pro studium metabolismu léčiv. Charakterizace metabolitů je vyžadována při vývoji nových léčiv. Mikrosomy, zdroj cytochromů P450, věrohodně napodobuje funkci jater, kdy jsou zachovány všechny metabolické dráhy první fáze biotransformace. Dextrometorfan (DEX), který byl vybrán jako testované léčivo, je mikrosomy přeměňován na tři metabolity. Na metabolismu DEX se podílí dvě izoformy cytochromu P450, izoforma 3A4 a 2C9. Pro sledování metabolismu DEX byly využity off-line a on-line podmínky inkubace. Metody kapilární elektrforézy(CE)nacházejí uplatnění při stanovení léčiv, metabolitů a biomarkerů. Kapilára může sloužit jako nástroj separace nebo současně může být využita jako mikronádoba pro enzymatickou reakci. Cílem této práce je srovnání CE metod separace DEX metabolitů připravených off-line a on-line způsobem. V off-line modu byla optimální separace metabolitů získána v tetraborátovém pufru (75 mM, pH 9,8) při 25C. Složení základního elektrolytu muselo být opět optimalizováno, aby byly splněny podmínky pro on-line mod, kdy inkubace i separace jsou prováděny v kapiláře současně. Nejvhodnější podmínky byly dosaženy v přítomnosti lineárního polyakrylamidu a 2-propanolu, jako aditiv základního elektrolytu. Metoda částečného plnění umožnila kombinovat odlišné pufry v rámci jedné kapiláry (přítomnost separačního a inkubačního pufru). Konečná separace byla provedena při 37C. Parametry zahrnující dávkovací schéma, promývání a další přístrojová nastavení jsou diskutována. |
| Související projekty: |