Comparison of electrophoretic methods for dextromethorphan metabolites separation prepared by in vitro incubations
| Název česky | Srovnání elektroforetických metod pro separaci dextrometorfanu a jeho metabolitů připravených in vitro inkubací |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2008 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | Book of Abstracts CECE 2008 |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Biochemie |
| Klíčová slova | phase I metabolites; microsomes; drug metabolism; CE methods |
| Popis | Nedílnou součástí výzkumu a vývoje nových léčiv je chrakterizace příslušných metabolitů. In vitro studie provedené v přítomnosti mikrosomů představují nástroj vhodný pro popis metabolismu léčiv. Lidské jaterní mikrosomy věrohodně zastupují úlohu přirozeného enzymatického aparátu účastnícího se metabolismu různých endogenních a exogenních látek. Mikrosomy jsou zdrojem cytochromů P450, enzymů první fáze biotransformace. Dextrometorfan (DEX) byl vybrán jako modelový substrát cytochromu P450 (CYP) izoformy 2D6. Navíc se metabolismu DEX účastní i CYP izoforma 3A4 a jsou tedy očekávány tři metabolity, jmenovitě 3-methoxymorfinan, 3-hydroxymorfinan a dextrorfan. Pro studium metabolismu DEX byl použit off-line a on-line způsob provedení. Metody kapilární elektroforézy jsou aplikovány na problematiku separace různých farmakologických a klinických vzorků, např. stanovení léčiv, metabolitů a biomarkerů [1-3]. Kapilára může sloužit jako nástroj separace, na druhé straně může být současně použita jako mikronádobka pro enzymovou reakci. Cílem práce je srovnání metod využitých při separaci DEX a jeho metabolitů. Metabolity připravené off-line inkubací byly úspěšně separovány v tetraborátovém pufru (80 mM, pH 9,85) při teplotě 25C. Pro on-line práci je potřeba zajistit kompatibilitu inkubačních a separačních podmínek, a tak nutností bylo použít metodu částečného plnění [4] a re-optimalizovat složení základního elektrolytu. Požadovaná separace metabolitů byla dosažena v elektrolytu s přídavkem lineárního polyakrylamidu (10%, v/v) a 2-propanolu (10%, v/v) při teplotě 37C. Na závěr jsou diskutovány jednotlivé části metody, např. postup dávkování, parametry separace a promývání. |
| Související projekty: |