Kometová analýza jako nástroj pro stanovení integrity DNA spermií. Porovnání různých protokolů.
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2009 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Kometová analýza je metoda, jejíž pomocí lze stanovit fragmentaci DNA v jednotlivých buňkách. Buňky s poškozenou DNA mají po elektroforéze tvar komety: kruhovitou „hlavu“ reprezentující nepoškozenou DNA a protáhlý „ohon“, jehož délka a intenzita závisí na míře poškození DNA a velikosti fragmentů. Specifika aplikace kometové analýzy na spermie spočívají v odlišné organizaci chromatinu spermií. Ten je, na rozdíl od somatických buněk, asi šeskrát kompaktnější a obsahuje díky protaminům velké množství disulfidových vazeb. Proto je při sledování poškození DNA spermií rozhodujícím krokem efektivní lýza buněčných struktur a denaturace DNA bez zvyšování míry fragmentace. V této práci jsme sledovali kometovou analýzou bazální poškození DNA ve spermiích mužů,podstupujících vyšetření ejakulátu v Centru asistované reprodukce FN Brno. V několika experimetech bylo základní poškození DNA zmrazených vzorků porovnáno s poškozením DNA v čerstvě odebraných vzorcích spermatu, které byly analyzovány v den odběru. Nepozorovali jsme rozdíly v poškození DNA. Dále jsme porovnávali 2 různé metody buněčné lýzy. Protokol A zahrnoval proteolýzu pomocí proteinázy K v průběhu lýzy a protokol B využíval k destrukci membrán a chromatinových struktur jako hlavní detergent dijodosalicylát lithný. V obou protokolech byl navíc použit dithiothreitol, sloužící k redukci disulfidových vazeb. Jeho užití zároveň s proteinázou K v protokolu A však zvyšovalo míru poškození DNA spermií. Nejméně poškozená DNA byla pozorována při vyšetřeních, při kterých byl aplikován protokol B. |
| Související projekty: |