Informace o projektu
Využití kapilární elektroforézy pro studium metabolismu léčiv
- Kód projektu
- GA203/06/0047
- Období řešení
- 1/2006 - 12/2008
- Investor / Programový rámec / typ projektu
-
Grantová agentura ČR
- Standardní projekty
- Fakulta / Pracoviště MU
-
Přírodovědecká fakulta
- prof. RNDr. Zdeněk Glatz, CSc.
- doc. PharmDr. Jan Juřica, Ph.D.
- Mgr. Andrea Klimíčková
- Mgr. Jiří Konečný, Ph.D.
- doc. RNDr. Josef Tomandl, Ph.D.
- Klíčová slova
- kapilární elektroforéza, xenobiotika, metabolismus
Cílem tohoto projektu je zdokonalit a rozšířit aplikační množnosti kapilární elektroforézy, speciálně její modifikace metody EMMA (Electrophoretically Mediated MicroAnalysis) pro stanovení aktivity a studium membránově vázaných enzymů. Konkrétně bude studie zaměřena na skupinu důležitých detoxikačních enzymů – cytochromy P450, které se v organismu podílí mimo jiné na metabolismu léčiv, jejich detoxikaci, případně aktivaci. Hlavní pozornost bude zaměřena na možnost kombinace metody EMMA s technikou částečného plnění kapiláry, při které je část kapiláry naplněna pufrem optimálním pro příslušnou enzymovou reakci, zatímco zbytek kapiláry základním elektrolytem optimálním pro separaci substrátů a především produktů příslušné enzymové reakce. Tím by měla být odstraněna hlavní limitace metody EMMA, kterou je právě potřeba stejného pufru – základního elektrolytu jak pro enzymovou reakci, tak pro vlastní separaci. Uvedená metoda bude využita pro stanovení aktivity a studium různých izoenzymů cytochromů P450 a to za použití různých módů kapilární elektroforézy – kapilární elektroforézy ve volné kapiláře, micelární elektrokinetické kapilární chromatografie, případně chirální kapilární elektroforézy. Bude přitom použita klasická UV-VIS detekce s diodovým polem, pro identifikaci analytů bude testována MS v off-line uspořádání. Jako zdroj cytochromů P450 bude využita mikrosomální frakce, v případě dostupnosti rekombinantní formy cytochromů P450. Jako substráty bude testována celá řada důležitých farmakologických substancí. Hlavní výhodou této metody je malá spotřeba chemikálií, což je důležité především v případě enzymových preparátů, substrátů, případně inhibitorů. Automatizace všech kroků vlastního stanovení navíc eliminuje možné experimentální chyby.
Publikace
Počet publikací: 36
2008
-
On-line preconcentration of 4-hydroxydiclofenac for MEKC separation by means of sweeping in homogenous electric field
Book of Abstracts CECE 2008, rok: 2008
-
Využití elektroforeticky zprostředkované mikroanalýzy v proteomice pro on-line tryptické štěpení proteinů
XXI. biochemický sjezd ČSBMB a SSBMB, rok: 2008
2007
-
Cytochrome P450 2C9 Activity Study by Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography (Lecture)
Book of Abstracts, rok: 2007
-
Determination and utilization of drugs as markers of metabolic activity of cytochrome P450 (invited lecture)
Rok: 2007, druh: Další prezentace na konferencích
-
Determination of asymmetric dimethylarginine in human plasma by HPLC with coulometric detection
HPLC 2007. Abstract Book., rok: 2007
-
Determination of dimethylated arginines in human plasma by HPLC with fluorescent detection
Book of Abstracts, rok: 2007
-
Development of miniaturized drug metabolism system based on capillary electromigration methods
HPLC 2007. Abstract Book., rok: 2007
-
HPLC - ED determination of diclofenac and its hydroxylated metabolite as a marker of metabolic activity of CYP2C6 in rats
HPLC 2007. Abstract Book., rok: 2007
-
HPLC determination of midazolam and its three hydroxy metabolites in perfusion medium and plasma from rats
Journal of Chromatography B, rok: 2007, ročník: 852, vydání: 1-2
-
Integration of short-end injection procedure into EMMA methodology.
Journal of Chromatography A, rok: 2007, ročník: 1155, vydání: 1-2