Rodina eukaryotických 14-3-3 proteinů je zapojena v široké škále buněčných regulačních pochodů, včetně signalizace, kontroly buněčného cyklu či buněčné smrti. Doposud bylo identifikováno přes 1200 vazebných partnerů 14-3-3. Vzhledem ke své roli signálního uzlu jsou 14-3-3 nadějným cílem protirakovinné terapie a diskutuje se také jejich zapojení v Alzheimerově chorobě. Pro pochopení molekulárního mechanismu konkrétních proteinů je klíčová znalost jejich struktury. 14-3-3 proteiny zaujímají typicky dimerní formu, zajišťující jejich řádnou funkci. Bylo ovšem zjištěno, že fosforylace 14-3-3 na Ser58 vede k monomerizaci a to i za fyziologických podmínek. Funkce monomerů byla podrobena mnoha studiím, zpravidla s využitím škály monomerních mutací, z důvodu obtížné přípravy fosforylovaného proteinu v dostatečné kvalitě a množství. Byla objevena chaperonová aktivita 14-3-3 monomeru a pozorována jeho modifikovaná interakce s 14-3-3 partnery. Struktura monomerního 14-3-3 zůstala však eluzivní, s rozporuplnými výsledky napříč literaturou. V posledních letech se ovšem v naší laboratoři podařilo připravit vysoce čistý fosforylovaný 14-3-3, vhodný i pro komplexnější strukturní experimenty. Cílem tohoto projektu bude tedy strukturní studie monomerního 14-3-3. Bude prozkoumáno využití selektivního 19F NMR značení a optimalizovány krystalizační podmínky, se záměrem vytvoření prvního krystalu monomeru 14-3-3.

Publications